4-Nitrophenyl beta-D-galactopyranoside CAS:200422-18-0

Efek: ONPG adalah substrat yang secara spesifik digunakan untuk mendeteksi keberadaan dan aktivitas enzim β-galaktosidase. Ketika enzim β-galaktosidase hadir dan aktif, enzim ini memecah ONPG menjadi dua produk: o-nitrofenol dan turunan galaktosa. Pelepasan o-nitrofenol menghasilkan perubahan warna kuning, yang dapat diukur menggunakan spektrofotometer.

Aplikasi: ONPG memiliki beberapa aplikasi dalam penelitian biologi molekuler dan biokimia:

Penentuan aktivitas β-galaktosidase: ONPG umumnya digunakan untuk mengukur dan mengkuantifikasi aktivitas enzim β-galaktosidase. Laju pembentukan o-nitrofenol, yang berbanding lurus dengan aktivitas enzim, dapat diukur secara spektrofotometri.

Ekspresi dan regulasi gen: ONPG sering digunakan dalam eksperimen yang berkaitan dengan studi ekspresi dan regulasi gen. Ia sering digunakan dalam uji protein fusi, seperti sistem fusi lacZ yang umum digunakan, untuk mempelajari ekspresi gen di bawah kendali promotor spesifik. Aktivitas beta-galaktosidase yang diukur menggunakan ONPG memberikan wawasan tentang tingkat ekspresi gen.

Penyaringan aktivitas β-galaktosidase: ONPG dapat digunakan sebagai metode penyaringan kolorimetri dalam teknologi DNA rekombinan untuk mengidentifikasi keberadaan dan fungsionalitas gen LacZ, yang mengkode β-galaktosidase. Metode penyaringan ini membantu dalam mengidentifikasi klon yang mengandung gen yang diinginkan.

Studi kinetika enzim: ONPG juga berguna dalam mempelajari kinetika enzim β-galaktosidase. Dengan mengukur laju reaksi enzim-substrat pada konsentrasi substrat yang berbeda, dimungkinkan untuk menentukan parameter kinetik seperti konstanta Michaelis-Menten (Km) dan laju reaksi maksimum (Vmax).