Banyak sekali pahlawan tanpa tanda jasa disekitar kita, yang terlihat biasa saja, namun nyatanya diam-diam mereka telah memberikan kontribusi yang besar bagi kita.Proteinase K adalah "pahlawan tanpa tanda jasa" dalam industri diagnostik molekuler, meskipun dibandingkan dengan industri "besar dan berkuasa", proteinase K sangat rendah sehingga kita telah lama mengabaikan pentingnya hal ini.Dengan merebaknya epidemi mahkota baru, permintaan proteinase K melonjak, dan pasokan dalam dan luar negeri jauh tertinggal dari konsumsi, dan semua orang tiba-tiba menyadari bahwa proteinase K sangat penting.
Apa gunanya proteinase K?
Proteinase K adalah protease serin dengan aktivitas enzim proteolitik dan dapat mempertahankan aktivitas di berbagai lingkungan (pH (4-12,5), buffer garam tinggi, suhu tinggi 70°C, dll.).Selain itu, aktivitas proteinase K tidak dihambat oleh SDS, urea, EDTA, guanidine hydrochloride, guanidine isothiocyanate, dll., dan sejumlah deterjen juga dapat meningkatkan aktivitas proteinase K. Dalam perawatan medis (disinfeksi virus dan mikroba ), makanan (pelunasan daging), kulit (pelunakan rambut), pembuatan anggur (klarifikasi alkohol), persiapan asam amino (bulu terdegradasi), ekstraksi asam nukleat, hibridisasi in situ, dll., proteinase K Ada aplikasinya.Aplikasi yang paling umum digunakan adalah ekstraksi asam nukleat.
Proteinase K dapat mengenzimolisis semua jenis protein dalam sampel, termasuk histon yang terikat erat dengan asam nukleat, sehingga asam nukleat dapat dilepaskan dari sampel dan dilepaskan ke dalam ekstrak, sehingga memudahkan langkah ekstraksi dan pemurnian selanjutnya.Dalam mendeteksi asam nukleat virus, proteinase K merupakan salah satu komponen penting dalam larutan pengambilan sampel virus.Proteinase K dapat memecahkan dan menonaktifkan protein selubung virus, sehingga lebih aman selama tahap pengangkutan dan deteksi;selain itu, proteinase K juga dapat mendegradasi RNase, mencegah degradasi RNA virus, dan memfasilitasi deteksi asam nukleat.
Ketenaran semalam dari proteinase K
Baik di bidang penelitian ilmiah atau di bidang IVD, ekstraksi asam nukleat adalah eksperimen paling dasar, sehingga proteinase K selalu menjadi keberadaan yang sangat penting.Namun, di masa lalu, proteinase K kurang dikenal dibandingkan perannya.Hal ini sebagian besar disebabkan oleh hubungan penawaran dan permintaan proteinase K yang sangat stabil.Hanya sedikit orang yang mengira pasokan proteinase K akan menjadi masalah.
Dengan merebaknya epidemi mahkota baru, permintaan akan pengujian asam nukleat meningkat.Pada akhir Juni 2020, Tiongkok telah menyelesaikan hampir 90 juta tes mahkota baru, dan jumlah ini bahkan lebih mengkhawatirkan dalam skala global.Dalam percobaan ekstraksi asam nukleat, konsentrasi kerja proteinase K adalah sekitar 50-200 μg/mL.Umumnya, dibutuhkan sekitar 100 μg proteinase K untuk mengekstraksi sampel asam nukleat.Dalam penggunaan sebenarnya, untuk meningkatkan efisiensi ekstraksi asam nukleat, seringkali Proteinase K akan digunakan dalam jumlah yang lebih banyak.Deteksi asam nukleat pada virus corona baru telah menyebabkan permintaan proteinase K dalam jumlah besar.Keseimbangan pasokan dan permintaan proteinase K dengan cepat rusak, dan proteinase K menjadi bahan pencegahan epidemi yang penting dalam semalam.
Kesulitan dalam produksi proteinase K
Meskipun dengan berkembangnya epidemi, pentingnya proteinase K telah dihargai oleh masyarakat, namun sayang sekali karena rendahnya harga proteinase K, hanya sedikit perusahaan dalam negeri yang terlibat dalam produksi proteinase K. Ketika masyarakat ingin meningkatkan produksi proteinase K Selama proses produksi, ditemukan bahwa proteinase K adalah protein yang sangat istimewa.Meningkatkan kapasitas produksi proteinase K dalam waktu singkat sangatlah menantang.
Produksi proteinase K skala besar menghadapi kesulitan berikut
1. Ekspresi rendah
Proteinase K dapat mendegradasi sebagian besar protein secara non-spesifik dan menyebabkan toksisitas serius pada sel inang ekspresi.Oleh karena itu, tingkat ekspresi proteinase K umumnya sangat rendah.Penapisan sistem ekspresi dan strain yang mengekspresikan proteinase K tinggi umumnya memerlukan siklus yang lebih lama.
2. Residu pigmen dan asam nukleat
Fermentasi skala besar menghasilkan sejumlah besar pigmen dan residu asam nukleat inang.Sulit untuk menghilangkan kotoran ini dengan proses pemurnian sederhana, dan pemurnian kompleks meningkatkan biaya dan mengurangi tingkat pemulihan.
3. Ketidakstabilan
Proteinase K tidak cukup stabil, dapat melakukan enzimolisis sendiri, dan sulit untuk menyimpannya secara stabil pada suhu 37°C untuk waktu yang lama tanpa bahan pelindung.
4. Mudah mengendap
Saat menyiapkan bubuk proteinase K kering beku, untuk memastikan bahwa kandungan padat proteinase K dalam bubuk kering beku besar, perlu ditambahkan bahan pelindung kering beku dengan konsentrasi tinggi, tetapi bila konsentrasi proteinase K mencapai 20mg/mL ke atas, mudah Agregasi membentuk endapan, yang menyebabkan kesulitan besar pada pengeringan beku proteinase K dengan kandungan padatan tinggi.
5. Investasi besar
Proteinase K memiliki aktivitas protease yang kuat dan dapat menghidrolisis protease lain di laboratorium.Oleh karena itu, proteinase K memerlukan area produksi khusus, peralatan, dan personel untuk penelitian dan pengembangan serta produksi.
Larutan proteinase K XD BIOCHEM
XD BIOCHEM memiliki platform ekspresi dan pemurnian protein yang matang, serta memiliki pengalaman yang kaya dalam ekspresi dan pemurnian protein rekombinan serta optimalisasi proses produksi.Melalui pembentukan tim penelitian dan pengembangan yang cepat, proses produksi proteinase K dalam skala besar telah diatasi.Output bulanan bubuk beku-kering lebih dari 30 KG.Produk ini memiliki kinerja yang stabil, aktivitas spesifik enzim yang tinggi, dan tidak ada sitokrom inang dan residu asam nukleat.Selamat datang untuk menghubungi XD BIOCHEM Dapatkan paket uji coba (Email:sales@xdbiochem.comTelp: +86 513 81163739).
Solusi teknis XD BIOCHEM meliputi
Dengan menggunakan integrasi plasmid multi-salinan, strain berekspresi tinggi dengan tingkat ekspresi 8g/L dipilih, yang mengatasi masalah rendahnya tingkat ekspresi proteinase K.
Melalui pembentukan proses pemurnian multi-langkah, sitokrom inang dan residu asam nukleat proteinase K berhasil dihilangkan di bawah nilai standar.
Melalui penyaringan formulasi buffer pelindung dengan throughput tinggi, buffer yang dapat menyimpan proteinase K secara stabil pada suhu 37°C dipilih.
Penyaringan buffer mengatasi masalah bahwa proteinase K mudah berkumpul dan mengendap pada konsentrasi tinggi, dan meletakkan dasar untuk pengeringan beku dengan kandungan padat proteinase K yang tinggi.
Sampel XD BIOCHEM proteinase K
Uji stabilitas XD BIOCHEM proteinase K: tidak akan ada perubahan aktivitas yang signifikan setelah 80 hari pada suhu kamar
Uji stabilitas XD BIOCHEM proteinase K: tidak akan ada perubahan aktivitas yang signifikan setelah 80 hari pada suhu kamar.
Perbandingan efek ekstraksi asam nukleat dari XD BIOCHEM proteinase K dan produk pesaing.Dalam proses ekstraksi asam nukleat, XD BIOCHEM dan proteinase K kompetitif digunakan masing-masing.Efisiensi ekstraksi XD BIOCHEM proteinase K lebih tinggi dan nilai Ct gen target lebih rendah.
Waktu posting: 31 Des-2021